PCR的原理是什么
更新时间:2020-12-14
作者:admin
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PCR(聚合酶链式反应)技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。我们公司在东莞、香港都有grs再生环保塑料pcr产品库,欢迎咨询。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成:
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
重复循环变性→退火→延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2——4分钟,2——3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
PCR反应条件为温度、时间和循环次数。温度与时间的设置:基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90——95℃变性,再迅速冷却至40——60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70——75℃。
在Taq DNA聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因(长度为100——300bp时)可采用二温度点法,除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。
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